它面临着缺乏精确的生物标志物来预测新辅助化学免疫疗法（NACI）的反应并确定患者是否应该在早期乳腺癌（BC）中使用免疫检查点抑制剂（ICIs）的困境。我们的目的是开发一种基因特征来预测 BC 患者的 NACI 反应，并确定适合添加 ICI 的个体。纳入了两个 I-SPY2 队列和一个华西医院接受 NACI 治疗的患者队列。机器学习算法用于识别关键基因。主成分分析用于计算 ImPredict (IP) 分数。基于逻辑回归分析检查生物标志物和治疗方案之间的相互作用。通过免疫组织化学（IHC）和多重 IHC 研究 IP 评分与免疫微环境之间的关系。发现队列、验证队列 1 和内部队列中 IP 评分的曲线下面积分别为 0.935、0.865 和 0.841 。标记物-治疗相互作用测试表明，免疫治疗的获益在高 IP 评分和低 IP 评分的患者之间存在显着差异（交互作用 p <0.001），并且高 IP 评分的患者更适合添加免疫治疗。我们的 IP 模型在预测方面表现出良好的性能NACI 反应是识别可从 ICI 中受益的 BC 患者的有效工具。它可以帮助临床医生优化治疗策略并指导临床决策。© 作者（或其雇主）2024。CC BY-NC 允许重复使用。禁止商业再利用。请参阅权利和权限。英国医学杂志出版。

治疗耐药性是免疫检查点抑制剂实现长期获益的主要障碍。新辅助抗PD-1耐药的潜在机制仍不清楚。使用队列中切除的肿瘤样本进行多组学分析，包括质谱流式细胞术、单细胞RNA-seq、bulk RNA-seq和多色流式细胞术的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者接受了新辅助抗 PD-1 治疗。从未经治疗的患者获得的肿瘤和配对肺部样本用作对照。使用从新鲜组织和肺癌细胞系中分离的原代细胞进行体外实验。体内实验采用Lewis小鼠模型。组织驻留记忆CD8 T细胞（CD8 TRM）的数量、分化状态和克隆扩增与新辅助抗PD-1治疗的疗效呈正相关。人类非小细胞肺癌。相反，未成熟CD1c经典2型树突状细胞（imcDC2）和galectin-9癌细胞的数量与治疗效果呈负相关。发现了一个上皮/imDC2 抑制轴通过 galectin-9/TIM-3 抑制 CD8 TRM 的抗肿瘤反应。 CD8 TRMs 和半乳糖凝集素 9 癌细胞相关基因的表达水平可预测人类 NSCLC 患者抗 PD-1 新辅助治疗的临床结果。最后，阻断TIM-3和PD-1可以通过促进imcDC2和CD8 TRM介导的肿瘤杀伤的抗原呈递来提高荷瘤小鼠的存活率。表达Galectin-9的肿瘤细胞维持新辅助抗肿瘤药物的原发耐药性。通过半乳糖凝集素 9/TIM-3 介导的 imcDC2 和 CD8 TRM 抑制来治疗 NSCLC。补充抗 TIM-3 可以打破上皮/imcDC2/CD8 TRM 抑制环，从而克服抗 PD-1 耐药性。NCT03732664.© 作者（或其雇主）2024。CC 允许重复使用BY-NC。禁止商业再利用。请参阅权利和权限。英国医学杂志出版。

胰腺导管腺癌（PDAC）的特点是免疫逃避，导致预后不良。癌症相关成纤维细胞 (CAF) 在协调 PDAC 肿瘤微环境中发挥着关键作用。我们研究了 CAF 衍生的细胞外囊泡 (EV) 包装的长非编码 RNA (lncRNA) 在免疫逃避中的作用，并探索了使用装载小干扰 RNA (siRNA) 的工程化 EV 进行基因治疗作为潜在的治疗策略。我们的研究结果强调了来自 CAF 的 EV 包装的 lncRNA RP11-161H23.5 在通过下调 HLA-A 表达（抗原呈递的关键组成部分）促进 PDAC 免疫逃避方面的重要性。从机制上讲，RP11-161H23.5 与 CNOT4（mRNA 去腺苷酸酶 CCR4-NOT 复合物的亚基）形成复合物，通过缩短其 Poly(A) 尾来增强 HLA-A mRNA 的降解。这种免疫逃避机制会损害抗肿瘤免疫反应。为了解决这个问题，我们提出了一种创新方法，利用工程化的 EV 作为基于 siRNA 的基因治疗的天然和生物相容性纳米载体，该策略有望提高 PDAC 免疫治疗的有效性。总体而言，我们的研究揭示了 CAF 衍生的 EV 包装的 lncRNA RP11-161H23.5/CNOT4/HLA-A 轴在 PDAC 免疫逃避中的关键作用，并提出了一种新的治疗干预途径。© 2024 。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

细胞外囊泡（EV）正在成为治疗性生物制剂递送的有前景的载体。基因工程代表了将感兴趣的蛋白质加载到 EV 中的强大策略。富含 EV 的蛋白质的鉴定可提高蛋白质货物的装载效率。许多富含 EV 的蛋白质通过运输 (ESCRT) 依赖途径所需的内体分选复合物被分选到 EV 中。与此同时，病毒通过保守的晚期结构域基序劫持这种 EV 生物合成机制，以促进宿主细胞的流出。受 EV 和病毒生物发生相似性的启发，我们开发了一种基于 Late 域的合成 EV 支架蛋白，该蛋白能够在 EV 表面展示一组单链可变片段 (scFv)。我们将该支架命名为基于晚期域的外泌体抗体表面展示平台（LEAP）。我们应用LEAP支架对HEK293T细胞衍生的EV进行重编程，通过在EV表面同时展示αPD-L1和αCD3 scFv（表示为αPD-L1×αCD3双特异性T细胞接合外泌体，BiTExos）来引发T细胞抗肿瘤免疫。 ）。我们证明，αPD-L1×αCD3 BiTExos 主动重定向 T 细胞与 PD-L1 肿瘤细胞结合，促进 T 细胞激活、增殖和杀肿瘤细胞因子的产生。此外，αPD-L1×αCD3 BiTExos 促进 T 细胞浸润到肿瘤微环境中，从而减轻体内肿瘤负荷。我们的研究表明，LEAP 支架可以作为 EV 表面显示的平台，并可广泛应用于基于 EV 的生物医学应用。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

三阴性乳腺癌（TNBC）是最具侵袭性的乳腺癌亚型，化疗是 TNBC 的基石治疗。遗憾的是，新发现表明化疗促进肿瘤微环境发生促转移变化。细胞外囊泡（EV）与癌症耐药性和转移密切相关。然而，垂死癌细胞释放的 EV 对 TNBC 预后的影响以及相应的治疗策略的研究却很少。这项研究表明，紫杉醇化疗可从凋亡的 TNBC 细胞 (EV-Apo) 中诱导出富含 CXCL1 的 EV。 EV-Apo 通过激活 PD-L1 信号传导极化 M2 巨噬细胞，促进共培养 TNBC 细胞的化疗耐药和侵袭。然而，保霍苷 I (BHS) 通过调节 EV-Apo 信号使共培养的 TNBC 细胞对紫杉醇化疗显着敏感。从机制上讲，BHS 显着减少了 EV-Apo 内的 C-X-C 基序趋化因子配体 1 (CXCL1) 货物，因此通过抑制 PD-L1 激活来减弱巨噬细胞 M2 极化。此外，BHS 通过减少 TNBC 细胞多囊泡体 (MVB) 内腔内囊泡 (ILV) 的生物发生来减少 EV-Apo 释放。此外，BHS 与 flotillin 2 (FLOT2) 的 LEU104 残基结合，并中断其与 RAS 癌基因家族成员 31 (RAB31) 的相互作用，导致 RAB31-FLOT2 复合物驱动的 ILV 生物合成受阻。重要的是，BHS 通过抑制 EV-ApoCXCL1 诱导的 PD-L1 激活和肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 的 M2 极化，使紫杉醇显着化学增敏，从而抑制 TNBC 体内转移。这项开创性研究揭示了 EV-ApoCXCL1 作为化学敏感性 TNBC 的新型治疗靶点，并提出 BHS 作为一种有前途的化疗佐剂，通过干扰 EV-ApoCXCL1 生物发生来改善 TNBC 化学敏感性和预后。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

细胞外囊泡（EV）已成为治疗不同疾病的有前途的生物材料。然而，迄今为止，仅报道了少数具有临床转化潜力的EV，并且其在生物安全控制条件下的大规模制备也有限。在这项研究中，我们描述了一种具有良好临床应用潜力的新型EV：脱水诱导的细胞外囊泡（DIMV）。 DIMV 是一种微米直径的细胞囊泡，与之前报道的细胞囊泡相比，它含有更多的生物活性分子，例如蛋白质和 RNA，但不含 DNA。 DIMV的制备非常简单，具有高度的生物安全性，并且蛋白质利用率比自然分泌的EV大约高600倍。其他实验证明了分离前或分离后 DIMV 修饰的可行性，包括基因编辑、核酸封装或表面锚定、大小调整。最后，在动物模型上，我们直接展示了 DIMV 的生物安全性和免疫原性，并研究了其作为肿瘤疫苗或药物载体在癌症治疗中的潜在应用。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

上皮性卵巢癌（EOC）是一种常常致命的恶性肿瘤，其特点是对铂类化疗产生耐药性。因此，准确预测铂类药物疗效对于战略性选择术后干预措施以减轻与次优治疗结果和不良反应相关的风险至关重要。与血浆中的对应物相比，组织源性细胞外囊泡 (tsEV) 已成为检查 EOC 组织独特属性的强大工具。在这项研究中，对从 58 名铂类敏感和 30 名铂类耐药的 EOC 患者获得的 tsEV 进行了 4D 数据独立采集 (DIA) 蛋白质组测序。分析显示差异表达蛋白显着富集，这些蛋白主要与免疫相关途径相关。此外，通过 LASSO 回归鉴定了关键免疫相关蛋白 (IRP)。这些因素与通过单变量逻辑回归选择的临床参数相结合，用于构建采用多元逻辑回归的模型。该模型整合了三个 tsEV IRP：CCR1、IGHV_35 和 CD72，以及一个临床参数，即术后残留病灶的存在。因此，该模型可以预测 EOC 患者术后初始铂类化疗的疗效，甚至在化疗开始之前就提供预后见解。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

胰腺癌仍然是最致命的恶性疾病之一。以吉西他滨为基础的化疗仍然是一线全身治疗方法之一，但大多数患者会出现化疗耐药。最近，积累的证据证明了肿瘤微环境在促进化疗耐药中的作用。在肿瘤微环境中，胰腺星状细胞（PSC）是主要细胞成分之一，细胞外囊泡（EV）是细胞间通讯的常见介质。在这项研究中，我们发现SP1转录的miR-31-5p不仅靶向胰腺癌细胞中的LATS2，而且还通过EV转移调节PSC中的Hippo通路。因此，PSC 合成并分泌富含半胱氨酸的酸性蛋白 (SPARC)，该蛋白优先在基质细胞中表达，刺激胰腺癌细胞中的细胞外信号调节激酶 (ERK) 信号传导。因此，由于 miR-31-5p 调节的内在 Hippo 通路和外部 SPARC 诱导的 ERK 信号传导，胰腺癌细胞的存活率和化疗耐药性得到改善。在小鼠模型中，胰腺癌细胞中 miR-31-5p 的过度表达促进了共注射异种移植物的化疗耐药性。在组织微阵列中，miR-31-5p 表达较高的胰腺癌患者的总生存期较短。因此，miR-31-5p 通过 EV 调节肿瘤微环境中多种细胞类型的 Hippo 通路，最终有助于胰腺癌细胞的化疗耐药性。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

众所周知，小细胞外囊泡（sEV）从癌细胞中释放出来，并通过与受体细胞的相互作用促进癌症进展。我们之前曾报道，表达αVβ3整合素（一种在侵袭性神经内分泌前列腺癌（NEPrCa）中上调的蛋白质）的sEV有助于受体细胞中的神经内分泌分化（NED）。在这里，我们研究了 αVβ3 表达对 sEV 蛋白含量、密度和功能的影响。本研究中使用的 sEV 通过碘克沙醇密度梯度进行分离，并通过纳米颗粒跟踪分析、免疫印迹和单囊泡分析进行表征。我们对含有 αVβ3 的 sEV 的蛋白质组学谱显示，与对照 sEV 相比，参与细胞凋亡和坏死的典型效应子下调，肿瘤细胞存活因子上调。我们还表明，sEV 中 αVβ3 的表达导致 EV 标记（Alix、CD81、CD9）明显重新定位到低密度 sEV 亚群。这种低密度重新定位与细胞外基质 (ECM) 蛋白与 sEV 的相互作用无关。该 sEV 子集包含 αVβ3 和 αVβ3 下游效应子 NgR2，NgR2 是 NEPrCa 的新型标记物。我们发现，与不表达 αVβ3 的 sEV 相比，含有 αVβ3 的 sEV 负载有更高量的 NgR2。从机制上讲，我们证明含有 NgR2 的 sEV 不会影响 sEV 标记物谱，但当体内瘤内注射时，它们会促进肿瘤生长并诱导 NED。我们发现表达 NgR2 的 sEV 会增加受体细胞中粘附斑激酶 (FAK) 的激活，FAK 是已知的癌细胞增殖促进剂。我们还表明，NgR2 模拟了含有 αVβ3 的 sEV 的作用，因为与对照细胞相比，NgR2 转染子在体内表现出生长增加。总体而言，我们的结果描述了含有 αVβ3 整合素及其效应子 NgR2 的癌细胞来源的 sEV 的货物、密度和功能发生的变化，而不影响 sEV 四跨膜蛋白谱。© 2024 作者。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。

高灵敏度流式细胞仪已开发用于单个细胞外囊泡 (EV) 的多参数表征，但性能因仪器和校准方法而异。在这里，我们通过三台高灵敏度流式细胞仪、两台商用仪器 CytoFLEX/CellStream 和一台定制单分子流式细胞仪 (SMFC) 比较了源自人结直肠癌 (DiFi) 细胞的相同（分割）EV 样品的表征。 DiFi EV 使用膜染料 di-8-ANEPPS 和 PE 缀合的抗 EGFR 或抗四跨膜蛋白 (CD9/CD63/CD81) 抗体进行染色，以估计 EV 大小和表面蛋白拷贝数。基于使用交叉校准、硬染色珠进行校准的免疫荧光和囊泡大小的检测限 (LOD)，CytoFLEX 为 ∼10 PE/∼80 nm EV 直径，CellStream 为 ∼10 PE/∼67 nm。对于 SMFC，免疫荧光的 LOD 为 1 PE，尺寸≤ 35 nm。每个系统检测到的 EV 数量（di-8-ANEPPS /PE 颗粒）根据系统的 LOD 差异很大；例如，CellStream/CytoFLEX 分别仅检测到 SMFC 检测到的四跨膜蛋白标记 EV 的 5.7% 和 1.5%，并且使用 Super-CytoFLEX 进行测量和验证，CellStream/CytoFLEX 的中值 EV 直径和抗体拷贝数比 SMFC 大得多。分辨率/单分子 TIRF 显微镜。为了获得代表所有三个平台分析的常见 EV 群体的数据集，我们筛选出了低于 CytoFLEX LOD 的 EV 的 SMFC 和 CellStream 测量值（由珠校准 (10 PE/80 nm) 确定）。使用此过滤数据集的平台间一致性明显优于未过滤数据集，但通过应用使用 SMFC 数据进行阈值分析确定的更高截止值 (21 PE/120 nm)，可以获得结果之间更好的一致性。结果证明了指定 LOD 来定义 EV 群体分析对 EV 流式细胞术研究中仪器间重现性的影响，以及 SMFC 数据阈值分析为其他流式细胞仪提供半定量 LOD 值的效用。© 2024 作者（s）。 《Journal of Extracellular Vesicles》由 Wiley periodicals LLC 代表国际细胞外囊泡学会出版。