实体癌症在研究方面仍然是一个重要的健康挑战，这不仅是因为它们的结构和组织，而且还因为存在于肿瘤之间和同一肿瘤内的分子和基因变异。当考虑到癌症相关细胞、血管系统以及身体的免疫反应（或缺失）时，用于解决这种疾病的武器必须是多样化和精细的。开发针对肿瘤的基因治疗，有助于为癌症已经建立的多样化攻击线提供新的途径，可以潜在地克服这些策略所遇到的某些障碍，例如化疗治疗中缺乏肿瘤选择性。鉴于胰腺癌的高死亡率和复发率，包括基因治疗在内的新疗法正在积极开展研究。尽管目前没有针对胰腺癌的基因治疗上市，但是已经有相当数量的临床试验正在进行中，特别是在当前处于招募或者已经完成的阶段。

Agmatinase（AGMAT）是一种酶，能将精胺酸水解为腐胺和尿素。我们探究了在结直肠癌（CRC）中AGMAT的作用。通过进行增强和减弱功能的实验，我们研究了AGMAT在CRC细胞增殖、细胞周期进程和细胞凋亡中的作用。我们还通过将小鼠暴露于azoxy甲烷（AOM）和戊二酸二钠（DSS）建立了结肠炎相关性结直肠癌（CAC）模型，并通过介导短发夹RNA（shRNA）的腺相关病毒9（AAV9）靶向沉默AGMAT基因表达。体外实验表明，AGAMT的过量表达加速了CRC细胞的增殖并抑制了细胞凋亡，而AGMAT的靶向沉默则产生了相反的效果。有趣的是，致癌转录因子c-Myc可结合AGMAT启动子，并转录增加CRC细胞中AGMAT的表达。此外，在AOM/DSS处理的小鼠结肠中，c-Myc和AGMAT均上调表达，并靶向沉默AGMAT可显著减轻小鼠的结肠炎，并通过增加结肠长度，减轻隐窝损伤以及降低结肠组织中炎性指标（髓过氧化物酶、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、诱导型一氧化氮合酶和p65磷酸化）的水平来进行证实。值得注意的是，AGMAT的靶向沉默既减少了肿瘤数量和大小，也降低了AOM/DSS处理的小鼠结肠中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，并抑制了蛋白激酶B（AKT）和外周信号调节激酶（ERK）的磷酸化。总的来说，我们确定了AGMAT在CRC中促进肿瘤进展的作用。本研究结果对于寻找CRC潜在治疗靶点将有所助益。

双重靶向嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗被提出作为克服抗CD19 CAR-T治疗期间的抗原逃逸的潜在解决方案。我们进行了这项系统综述和荟萃分析，以调查这种新型治疗在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）和B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者中的疗效和安全性。我们基于数据库（PubMed，Web of Science，Embase和Cochrane）和会议摘要系统地搜索相关文献。主要的结局指标是最佳客观反应率（ORR）或完全缓解（CR），12个月的总生存率（OS）和无进展生存率（PFS），细胞因子释放综合征（CRS）和神经毒性。包括了15个注册的前瞻性开放标签临床试验。在260名B-NHL患者中，合并的最佳ORR和CR分别为77％（95％CI：0.71-0.82）和52％（95％CI：0.40-0.63），汇总的12个月PFS和OS分别为54.0％（95％CI：0.47-0.61）和66.0％（95％CI：0.56-0.77）。在159名B-ALL患者中，观察到的最佳CR组合为92％（95％CI：0.82-0.99），汇总的12个月PFS和OS分别为65.0％（95％CI：0.51-0.77）和73.0％（95％CI：0.56-0.92）。此外，在B-NHL患者中，14.0％（95％CI：0.04-0.29）的患者观察到≥3级CRS，其中5.0％（95％CI：0.02-0.08）的患者显示≥3级神经毒性；对于B-ALL患者，11.0％（95％CI：0.04-0.19）的患者发生≥3级CRS和神经毒性的比例为2.0％（95％CI：0.00-0.06）。这项研究表明了双重靶向CAR-T细胞治疗在B细胞恶性肿瘤中的安全性和临床疗效。进一步进行良好设计的随机对照试验以确定双重靶向CAR-T细胞治疗在B细胞恶性肿瘤患者中的作用。

溶瘤病毒是一种有前途的技术，可以攻击癌细胞并招募免疫细胞到肿瘤部位。由于Lipocalin-2受体（LCN2R）存在于大多数癌细胞上，我们使用它的配体LCN2来针对溶瘤腺病毒（Ads）靶向癌细胞。因此，我们将一个DARPin适配器融合到Ad5 (knob5) 的顶部来与LCN2结合，以重新定向病毒，以分析这种新的靶向方法的基本特性。该适配器在稳定表达LCN2R的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞和20种癌细胞系（CCLs）中使用Ad5病毒载体编码荧光素酶和绿色荧光蛋白进行了体外测试。LCN2适配器（LA）的荧光素酶测定显示与阻塞适配器（BA）相比，在表达LCN2R和不表达LCN2R的CHO细胞中，感染率提高了10倍。大多数CCLs显示出与BA绑定的病毒相比，LA-bound病毒的病毒摄取量增加了，并且对于五种CCLs，病毒摄取量与未改修的Ad5相当。流式细胞术和六方体免疫染色也显示出，在大多数测试的CCLs中，LA-bound病毒的摄取量增加，而BA-bound病毒的摄取量减少。在3D细胞培养模型中研究了病毒扩散，结果九种CCLs显示出LA-bound病毒的荧光信号比BA-bound病毒更早地增加。从机理上讲，我们发现，LCN2适配器仅在配体Enterobactin (Ent)缺失且独立于铁的情况下增加病毒的摄取量。综上，我们表征了一种新的基于DARPin的系统，能增强病毒的摄取，展示了未来溶瘤病毒疗法的潜力。

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法已经彻底改变了治疗血液恶性肿瘤的方式，但由于在肿瘤微环境中缺乏持久性和功能，尚未在实体肿瘤中获得类似的成功。我们先前报道了通过分泌抗PD-1 scFv增强CAR T细胞疗法在工程实体肿瘤模型中的效果，通过增强CAR T细胞的抗肿瘤功效，扩张和活力得到了证实。此后，我们改进了这个平台，创造了一个更优秀的细胞产品 - 分泌抗PD-1 scFv融合的单链三聚体4-1BB配体（αPD1-41BBL）的CAR T细胞。 4-1BB信号促进细胞毒性T淋巴细胞的增殖和生存能力，但在临床上使用激动剂抗体靶向4-1BB一直受到了低的抗肿瘤活性和高毒性的限制。使用4-1BB内酰胺结构域作为协同刺激信号的CAR T细胞，与使用CD28内酰胺结构域协同刺激的CAR T细胞相比，表现出较轻的抗肿瘤反应和更长的持久性。我们首次将CD28协同刺激的CAR T细胞改造成分泌融合蛋白的细胞，其中包含可溶的三聚体4-1BB配体。体外和体内实验证明，CAR19.αPD1-41BBL T细胞表现出减少的抑制性受体上调、增强的持久性和增殖能力，并且具有较少分化的记忆状态，与没有额外4-1BB：4-1BBL协同刺激的CAR T细胞相比较。因此，接受CAR19.αPD1-41BBL T细胞治疗的小鼠显示出显著的肿瘤生长控制和整体生存率的改善。受我们以CD19为模型抗原的临床前成功的激励，我们生产了靶向介质膜素的CAR T细胞，并证实了αPD1-41BBL分泌的CAR T细胞的增强型实体肿瘤疗效。

Adenovirus 5（Ad5）具有跨越大多数细胞类型的高效递导和更大的包装能力，因此成为一种引人注目的病毒载体选择。然而，已知已报道过 Ad5 的死亡事件和免疫原性，这也对其使用的安全性产生了质疑。在美国，对于所有采用 Ad5 包装的基因治疗剂量进行肿瘤内注射的临床试验，使用 Common Terminology Criteria for Adverse Events（CTCAE）进行了在线数据库搜索。未明确不良事件（AE）的研究被排除在外。收集的主要结果是≥3级（AE）评分。采用 Fisher's exact test 进行分析。确定了39项前瞻性临床试验，涉及各种癌症；其中14项研究仅使用治疗性 Ad5，12项与化疗、16项与放疗、11项与手术联用。共有3例死亡病例，756名患者中发生（0.4％），其中大部分与 Ad5 无关；由于缺氧性脑病、脾静脉血栓和疾病进展各1例。在报告总 AE（1-5级）的试验中，477名患者中共发生284个（10.3％）≥3级 AE 病例。其中 428 名患者中的 ≈2425 AE 中的总体威胁生命的（评分 4 级）AE 率为1.4％（34/2425 AE）。总体而言，最常见的≥3级AE是淋巴细胞减少症（14项研究，209名患者中的20.6％），呼吸困难（11项研究，208名患者中的8.7％）和中性粒细胞减少症（12项研究，174名患者中的8.6％）。最常见的 4 级 AE 是中性粒细胞减少症（4.6％）、淋巴细胞减少症（3.3％）和白细胞减少症（13项研究，192名患者中的3.1％）。我们的分析表明，Ad5 的整体安全性相对较高，并建议重新评估 Ad5 作为基因治疗产品的传递载体的使用。

早期传代（少于30代）和晚期传代（大于250代）的RL95-2人类子宫内膜腺鳞状癌细胞暴露于表皮生长因子（EGF）会产生密度和浓度依赖性效应。在低播种密度下，EGF（20 nM）抑制早期传代细胞的生长，而在高播种密度下，4.98 nM和20 nM浓度的EGF刺激了它们的生长。此外，无论种子密度如何，晚期传代细胞的生长都受到0.0166 nM EGF的刺激和4.98 nM和20 nM EGF的抑制。在低种子密度下，EGF（20 nM）引起了两代细胞的明显形态学改变。在低播种密度下，两代细胞的入侵抑制在Matrigel涂层滤器上明显。而在高播种密度下，EGF增强了侵袭性。在高播种密度下，EGF刺激了尿激酶型纤维蛋白原激活剂活性的增加，这可能增加了细胞降解细胞外基质的能力。此外，在EGF处理后，两代高种子密度细胞对Matrigel的粘附能力与侵袭性相关。

肿瘤致癌基因p21ras蛋白质的后转录翻译修饰需要一种脂质中间体法尼酰化，这是胆固醇生物合成中的一步，以便p21ras与细胞膜结合并使其能够转化培养细胞。我们测试了洛伐他汀（一种特异性胆固醇生物合成抑制剂）抑制体内ras致癌基因转化细胞生长的能力。从人类膀胱癌EJ转染H-ras致癌基因的Balb/c小鼠3T3细胞在裸鼠身上高度致瘤。转化EJ细胞的免疫共沉淀研究显示，洛伐他汀（1-100微摩尔）浓度依赖性地抑制p21ras与细胞膜的结合，并且10微摩尔的浓度可将p21ras与膜结合的数量降低50％。洛伐他汀在浓度范围内抑制EJ细胞生长，该范围与抑制p21ras与细胞膜结合所需范围密切相似。用洛伐他汀（50毫克/千克）处理皮下（s.c.）EJ肿瘤的裸鼠能够显著抑制这些肿瘤的生长，最早在四天时发现，到第12天时，洛伐他汀处理组的动物的肿瘤平均大小比盐水对照组小了3倍。 Western印迹研究表明，洛伐他汀（50毫克/千克）也能够抑制裸鼠身上植入的EJ肿瘤的p21ras与细胞膜结合。这些结果表明，洛伐他汀（一种胆固醇生物合成抑制剂）能够抑制经H-ras致癌基因转化的细胞在体内的肿瘤生长。结果还表明，抑制p21ras与细胞膜结合是ras致癌基因肿瘤转化的一个必要步骤，这是洛伐他汀发挥其抗肿瘤活性的一种机制。

六氟并咪唑（CCI-103F）是一种低氧细胞标记物，可通过体内[1H]/[19F]磁共振光谱（MRS）测量。发现在SCCVII肿瘤中CCI-103F的保留与肿瘤大小相关，较大的肿瘤保留更多的标记。这种相关性是可以预期的，因为较大的SCCVII肿瘤具有较大的低氧部分。还发现CCI-103F保留量与10 Gy辐照后存活的肿瘤细胞比例之间也有显著但不强的相关性，保留更大量CCI-103F的肿瘤具有更高的存活比例。这些结果表明，无创的MRS测量CCI-103F保留能够预测SCCVII肿瘤的放射敏感性。然而，CCI-103F保留与放射敏感性之间的相关性不强表明，在这些肿瘤中，低氧部分并不是影响放射敏感性的唯一因素。

多药耐药（mdr）被称为对抗癌药物的交叉耐药性，与细胞外质膜上能量依赖性外输泵P-糖蛋白的表达有关，该蛋白是mdr1基因的产物。当人乳腺癌细胞MCF-7转染人类mdr1基因（BC-19细胞）时，它们的P-糖蛋白水平与对多柔比星产生抗性的细胞（MCF-7/ADR）相当，但对多柔比星和长春碱的抗性降低了10到50倍。我们现在证明，当BC-19细胞稳定转染了蛋白激酶Cα（PKCα）时，多柔比星和长春碱的抗性增加了；转染PKCα的野生型MCF-7细胞没有表现出任何药物抗性变化。PKCα转染的BC-19细胞抗药性增强与PKC活性提高和P-糖蛋白的磷酸化增加以及药物积累降低有关。PKC活化剂丙酸酯二丁酸进一步增强了对多柔比星的耐药性，并刺激了P-糖蛋白的磷酸化。这些结果表明，转染P-糖蛋白的细胞并加入PKC会导致mdr增加，而PKC可能是这一过程的重要调节因子。