1992 年建立的 NK-92 细胞系具有高度活性的天然杀伤细胞 (NK) 细胞的所有特征，但具有更广泛和更强的细胞毒性。该细胞系由淋巴瘤患者的血细胞建立，并自 1998 年起被广泛用于研究，存放在美国类型细胞收藏中心。 全球范围内 NK-92 细胞的分发导致大量的科学发现，大大增加了对 NK-细胞生物学的理解。 NK-92 细胞还被开发用于临床使用，克服了从捐赠者或患者血液中获得和扩大 NK 细胞的挑战。 现已有超过100位癌症患者全球范围内接受未修改或基因工程改造的 NK-92 细胞治疗。 修改的细胞包括高亲和力的 Fc 受体表达的 NK-92 细胞 (haNKR) 和各种嵌合抗原受体靶向的 haNK 细胞 (t-haNKTM)。 报告 NK-92 细胞的输注是安全和有效的，有时即使在先前多次失效的患者中，也可以导致疾病缓解。 本文的目的是提炼对 NK-92 细胞及其基因变异的大量科学数据，突出相关实验发现，有助于更好地理解 NK 细胞生物学，并概述这些细胞在治疗癌症和感染方面的治疗潜力。 版权所有 © 2022 国际细胞与基因治疗学会。 由 Elsevier Inc. 发布。 保留所有权利。

CRISPR/Cas9系统已经彻底改革了基因编辑领域，使之变得可能，在人类基因组中高精度地中断、插入或替换感兴趣的序列。其简易的设计和广泛的适用性为治疗遗传性疾病开辟了多种治疗替代方案。确确实实，在最近几年中，基于造血干细胞的自我更新和多能分化特性，已经发展出了非常有前途的用于纠正血液学疾病的方法，使这个细胞亚集成为生物技术治疗的理想目标。这种技术已经应用于不同的先天性血液疾病，如原发性免疫功能不足、X-连锁严重综合征、X-连锁慢性肉芽肿病或Wiskott-Aldrich综合征，以及遗传性骨髓衰竭综合征，如Fanconi贫血、先天性无巨大核磷体血小板减少症或严重先天性中性粒细胞减少症。此外，CRISPR/Cas9基因编辑已经成功实现了用于癌症免疫疗法的新疗法，通过开发有前途的策略，如使用肿瘤溶解病毒或采用嵌合抗原受体T细胞疗法进行细胞转移。因此，考虑到不同基因和突变的多样性，我们可以通过CRISPR/Cas9以不同的方式利用不同的DNA修复机制，从同源修复到非同源端联接，再到最新的技术如碱基和质量编辑。虽然造血干细胞中的输送系统仍然是这种技术的瓶颈，但这次评论中显示的某些基因组编辑进展已经达到了临床阶段，并显示出非常有前途的初步结果。版权©2022国际细胞和基因治疗学会。由Elsevier Inc.发表。保留所有权利。

一直在持续进展的是创造更加高效和有用的CRISPR-Cas9基因组改良分子工具。这篇综述主要关注最近用基因编辑酶（BEs）进行临床和研究目的的文章。由于CRISPR-Cas9 BEs的高效性和广泛适用于基因修正和破坏，所以这是一个有用的系统。此外，与其他CRISPR-Cas9系统相比，基因编辑被建议作为一种更安全的方法，因为在多基因敲除过程中限制了双链断裂，且不需要毒性的DNA供体分子进行基因修正。因此，许多行业和学术团体正在开发基于基因编辑酶的临床应用，如癌症免疫疗法和基因治疗。本文将重点探讨现在和未来基于体内BE递送的应用及其临床应用。

调节性（或“容忍性”）树突状细胞（DCregs）是诱导或恢复特定抗原耐受性的高度有前途的创新细胞疗法，适用于免疫介导的炎症性疾病，包括器官移植物排斥、骨髓移植后的移植物抗宿主病和各种自身免疫性疾病。适用于移植的DCregs具有潜力降低患者对非特异性免疫抑制药物的依赖，该类药物可能会引起严重的副作用，增加感染和某些癌症的风险。本研究目的是提供我们制备和验证大量符合良好制造规范的DCregs用于静脉注射给28例器官（肝脏）移植受者的经验，并讨论影响满足释放标准和达到目标细胞数的因素。DCregs是通过从同意的健康成年预定肝脏移植供体的非移动的白细胞分离产物中精选单核细胞分数，并在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素（IL）-4中培养7天生成的。在培养期间的第0天和第4天加入维生素D3，第4天加入IL-10。释放和后释放标准包括细胞活力、纯度、表型、无菌和功能评估。单核细胞转化为DCregs的整体转化率为28±8.2％，产品存活率为94±5.1％。细胞表面T细胞共抑制：共刺激分子（程序性死亡配体-1：CD86）平均荧光强度比为3.9±2.2，CD40配体刺激后分泌的抗炎细胞因子：促炎细胞因子比（IL-10：IL-12p70）的平均比值为60±63（中位数=40）。从单个白细胞分离产物（n=25个供体）和两个白细胞分离产物（n=3个供体）生成的DCregs总数平均为489±223×106（n=28）。平均注射的DCregs总数为5.9±2.8×106/kg体重。对于27个产品中的25个（92.6％），达到了2.5-10×106/kg的目标细胞范围的DCreg数目。在良好制造规范条件下，从循环血单核细胞中很容易生成高纯度、符合多种质量标准的DCregs，以满足注入潜在器官移植受者的目标细胞数。版权所有©2022 年国际细胞和基因治疗协会。由Elsevier Inc.发表。保留所有权利。

造血干细胞移植（HSCT）对许多非恶性疾病具有治疗作用。随着HSCT和支持治疗技术的改进，这种挽救生命的治疗可能向更多患者提供。随着新的预备方案、扩大备选供体的可用性和移植物操作技术的发展，有很多选择最佳方案的选项。在此，作者回顾了进行HSCT的非恶性疾病患者的移植注意事项、移植目标、调理方案、供体选择和移植物操作策略。版权所有 © 2023国际细胞与基因治疗学会。 Elsevier Inc. 出版。保留所有权利。

在急性早幼粒细胞白血病（APL）中，由于疾病本身或早期使用全反式维甲酸治疗，外周血中的细胞负荷增加可能导致诱导化疗前发生高白细胞症（HL）。然而，由于担心这种侵入性程序后的凝血病理性，治疗性白细胞分离法很少使用。该研究旨在评估APL中的白细胞分离的效果和安全性，特别是对疗效和安全性的评估。我们回顾性分析了2009年1月至2022年3月新诊断的APL患者。在323名患者中，85名患者在诱导化疗前的白细胞计数超过40×109/L。将这39名患者与另外46名未接受白细胞分离治疗的患者进行了临床和实验室参数比较。白细胞分离组与非分离组比较，30天生存率有向更有利的趋势（76.9％和67.4％；P = 0.24）。两组之间的并发症包括随后的重症监护单位护理（P = 0.23）和严重出血事件（P = 0.13）的发生率没有显著差异。患者被分为亚组，在“顺序性HL”组中，白细胞分离组和未分离组的生存率分别为92.3％（95％置信区间[CI]，77.8％-100.0％）对58.3％（95％CI，38.6％-78.1％）（P = 0.03），在“症状性HL”组中为76.7％（95％CI，61.5％-91.8％）与54.8％（95％CI，37.3％-72.4％）（P = 0.03）。此外，白细胞分离组中“顺序HL”亚组的分化综合征和随之而来的不良事件的累积发生率显著低于非分离组。在由疾病本身或全反式维甲酸作用引起的“顺序HL”或“症状性HL”的APL中，治疗性白细胞分离法可用于降低白血病细胞负荷而不会造成明显风险。版权所有©2023年国际细胞与基因治疗学会。由Elsevier Inc.出版。保留所有权利。

采用特定的免疫细胞和干细胞的采用细胞疗法（ACT）已经成为一个有前途的治疗选择，未来可能会成为传统肿瘤治疗的补充选择。具体而言，治疗肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）在各种临床试验中已被证明对实体瘤有很好的疗效。尽管大肠癌（CRC）所造成的疾病负担和早逝人数非常高，但对来自CRC患者肿瘤组织中分离TILs的研究仍然很少。迄今为止，ACT的研究往往缺乏可控制和可比较的扩增过程以及精选的ACT相关T细胞群体。我们描述了一种生成患者特异性TILs的程序，这是进行CRC ACT临床试验的前提条件。这些TILs的制造和特征在重要模块中与通常用于此治疗方法的TILs不同。从12名接受原发CRC手术治疗的患者中获取肿瘤组织样本，主要为低微卫星不稳定性（pMMR-MSI-L）的肿瘤。在送审的切除标本中检查了肿瘤，把一定量的肿瘤组织移至一次性灌流生物反应器中。采用含有白细胞介素2和白细胞介素12的起始培养基，在符合GMP标准的闭环灌流生物反应器系统中对组织样本进行自动控制和高度重复的培养过程。短期加入特定的激活混合物启动TIL的培育生长。在随后的扩增中，TILs在富含白细胞介素2的培养基中生长。在Zellwerk ZRP生物反应器中的低规模双相过程中扩张TILs，在高氧环境下结果产生约20亿个细胞。扩展的TILs主要由ACT相关CD3+/CD8+效应记忆表型（CD45RO+/CCR7−）组成（73％）。在非特异性刺激（干扰素γ，肿瘤坏死因子α细胞因子分析）下证实其高功能潜力。Copyright © 2023 International Society for Cell & Gene Therapy. Published by Elsevier Inc. All rights reserved.

目前大多数嵌合抗原受体（CAR）T细胞是通过病毒转导生成的，这会导致CAR的持续表达并可能引起严重的不良反应。正在开发基于信使RNA的方法来制造CAR T细胞以克服这些挑战。然而，向T细胞输送mRNA的最常用方法是电穿孔，这可能对细胞有毒。作者设计和构建了一个使用噬菌体MS2系统与外泌体上高表达的蛋白质溶酶体相关膜蛋白2同工酶B相结合的外泌体传递平台。作者的传递平台实现了对目标细胞的mRNA的特异性装载和传递，并实现了特定蛋白的表达，而抗CD3 / CD28单链变量片段（scFv）在外泌体膜外表达有效地激活了原代T细胞，类似于商业磁珠。通过设计的外泌体递送CAR mRNA和抗CD3 / CD28 scFv，可用于体外生产具有癌细胞杀伤能力的CAR T细胞。作者的结果表明，构建的外泌体递送平台具有直接将原代T细胞转化为CAR T细胞的潜在应用，并为体内生产CAR T细胞提供了一种新策略。版权所有©2023国际细胞和基因治疗协会。由Elsevier Inc.出版。保留所有权利。

嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）已经在血液恶性肿瘤方面展现出了惊人的疗效，但在胶质母细胞瘤（GBM）等实体肿瘤方面并未取得同样的成功。因此需要高通量的功能筛选平台来评估CAR-T对实体肿瘤细胞的毒性。我们使用实时、无标记的细胞阻抗感知技术，评估以抗二十二烷四醇四磷酸酯（GD2）为靶点的CAR-T制品在2天和7天的体外培养中对GD2+病人来源的GBM干细胞的毒力。我们比较了两种基因转移模式下的CAR-T产品：逆转录病毒转导和无病毒CRISPR编辑，并运用终点流式细胞术、细胞因子分析和代谢组学数据来构建CAR-T细胞毒力的预测模型。结果显示，与逆转录病毒转导的CAR-T细胞相比，无病毒CRISPR编辑的CAR-T细胞在细胞溶解上更快， begingroup accompanied by增加的炎性细胞因子释放、CD8+ CAR-T细胞在共培养条件下的存在以及CAR-T细胞对3D GBM球体的浸润。计算分析表明，对于GBM干细胞的短期（2天）和长期（7天）CAR-T细胞毒力的最好预测是自噬体积和细胞体积的TB和底物削减，其中与肿瘤坏死因子α浓度的增加相关的谷氨酸、乳酸和甲酸浓度的减少最具有预测性。这些研究证实了阻抗感知作为用于实体肿瘤中CAR-T细胞毒力的高通量无标记生物学分析技术。版权所有©2023年国际细胞和基因治疗学学会。由Elsevier Inc.出版。保留所有权利。

尽管癌症疫苗的策略是提供对已建立的肿瘤的治疗效果，但迫切需要开发针对非病毒性癌症的预防性疫苗。在本研究中，我们通过阳离子修饰的肿瘤相关抗原（即人源性黑色素瘤gp10025-33肽（KVPRNQDWL-RRRR））和阴离子胞嘧啶-磷酸-鸟苷脱氧核苷酸（CpG-ODN）佐剂之间静电相互作用制备了聚合物复合纳米粒子。我们之前已经通过弱电离子导入（IP）成功地传递了各种亲水性大分子。在此，我们研究了IP在预防性复合物疫苗经皮传递中的有效性。IP成功地在皮肤中建立了疫苗的均匀分布。疫苗的功效已经证明可以抑制黑色素瘤的生长。观察到明显的肿瘤回归效应，以及各种细胞因子（主要为干扰素（IFN）-γ）的mRNA表达水平升高，以及细胞毒性CD8+ T细胞的浸润。此外，我们评估了疫苗的治疗效果，并发现肿瘤负担显著降低。通过上调IFN-γ证实了全身免疫力的刺激作用。这是第一个证明IP在经皮传递预防性黑色素瘤疫苗中使用的报告。